Chromatografia cieczowa LC

Chromatografia cieczowa to jedna z najbardziej zaawansowanych i precyzyjnych technik analitycznych. W zależności od szybkości przepływu fazy ruchomej, ciśnienia w układzie chromatograficznym i rozmiaru kolumny chromatograficznej można wyróżnić:

• wysokosprawną chromatografię cieczową (z ang. High Performance Liquid Chromatography; HPLC),
• ultrawysokosprawną chromatografię cieczową (z ang. Ultra High Performance Liquid Chromatography; UHPLC),
  – mikrochromatografię cieczową (z ang. micro Liquid Chromatography; mikroLC),
• nanochromatografię cieczową (nano Liquid Chromatography; nanoLC).

Zasada działania chromatografii cieczowej

Chromatografia cieczowa wykorzystuje zjawiska oddziaływań fizyko-chemicznych zachodzących w kolumnie chromatograficznej. Próbka do układu chromatograficznego wprowadzana jest przez zawór dozujący znajdujący się w automatycznym podajniku próbek (zwanym zwyczajowo autosamplerem). Tłoczona z pompy faza ruchoma wprowadza próbkę do kolumny chromatograficznej wypełnionej stałym sorbentem. Składniki analizowanej mieszaniny są rozdzielane na skutek różnic w oddziaływaniu z fazami ruchomą i stacjonarną.

Następnie związki chemiczne niesione fazą ruchomą trafiają do detektora. Sygnały rejestrowane przez oprogramowanie są funkcją właściwości fizyko-chemicznych i stężenia indywiduów chemicznych przepływających przez detektor. Właściwe dobranie składu fazy ruchomej, kolumny chromatograficznej, detektora do charakteru badanych próbek oraz prawidłowo działające pompy i dozownik są podstawą uzyskania bardzo precyzyjnych i powtarzalnych wyników.

Zastosowania chromatografii HPLC

Chromatografia cieczowa ma szerokie zastosowanie w badaniach naukowych z dziedziny chemii, biologii, biotechnologii, farmacji, a także w rutynowych laboratoriach badających bezpieczeństwo i jakość żywności, stan środowiska naturalnego, medycznej diagnostyki laboratoryjnej, toksykologii, przemyśle farmaceutycznym.

Podstawowe elementy chromatografu cieczowego

Chromatograf cieczowy składa się z bezpiecznych zbiorników z fazą ruchomą, układu odgazowania cieczy (degazera), pompy lub pomp chromatograficznych, automatycznego podajnika próbek (autosamplera), kolumny chromatograficznej zamkniętej w piecu do kolumn (termostacie), detektora oraz zabezpieczonego zbiornika na zlewki. Analitycy mają do dyspozycji detektory optyczne, chemiczne. Najczęściej stosowane detektory to: diodowy, fluorescencyjny, elektrochemiczny, światła rozproszonego oraz spektrometr mas.

Właściwe dobranie każdego z elementów chromatografu, optymalizacja warunków pracy, prawidłowość działania są gwarancją uzyskania w krótkim czasie dokładnych i precyzyjnych wyników jakościowych i ilościowych dla próbek zawierających śladowe stężenia substancji chemicznych.